建议收藏!超全实验室仪器操作规范一篇全掌握

2022-03-02 17:20:56 inrefine 6

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生物安全柜、超净工作台、培养箱、摇床、高压灭菌器、烘箱及干燥箱、离心机、酸度计、移液器、纯水系统……众多实验室仪器操作规范一篇文章全掌握!东南仪诚提醒大家这些仪器操作千万别踩“雷”。


一、生物安全柜

1、应参考国家标准和相关文献,对所有可能的使用者都介绍生物安全柜的使用方法和局限性。应当发给工作人员书面的规章、安全手册或操作手册。特别需要明确的是,当出现溢出、破损或不良操作时,安全柜就不再能保护操作者。


2、生物安全柜运行正常时才能使用。


3、生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。


4、安全柜内应尽量少放置器材或标本,不能影响后部压力排风系统的气流循环。


5、安全柜内不能使用本生灯,否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器,但最好使用一次性无菌接种环。


6、所有工作必须在工作台面的中后部进行,并能够通过玻璃观察挡板看到。


7、尽量减少操作者身后的人员活动。


8、操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。


9、不要使实验记录本﹑移液管以及其他物品阻挡空气格栅,因为这将干扰气体流动,引起物品的潜在污染和操作者的暴露。


10、工作完成后以及每天下班前,应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。


11、在安全柜内的工作开始前和结束后,安全柜的风机应至少运行5min。


12、在生物安全柜内操作时,不能进行文字工作。



二、超净工作台

1、使用前15-20分钟用75%酒精擦拭工作台面,将实验所需的物品放于台面中间工作区的两侧,使用的移液器吸头、试管、培养皿等均事先灭菌。


2、使用前15-20分钟开紫外灯,对工作区域进行照射杀菌,将细菌、病毒全部杀死。为避免物品过多而导致紫外灭菌不彻底,台面平时只需放移液器、75%酒精喷壶、75%酒精棉、接种器、酒精灯、记号笔和打火机等。


3、使用前10分钟将通风机启动,以排除臭氧等有害气体。


4、操作时将照明灯开关打开,关掉杀菌灯。


5、操作前用75%酒精棉擦洗双手和前臂。任何进入超净台的物品都必须经过75%酒精擦拭后才可进入超净台。


6、工作台面不要存放不必要的物品,以保持工作区的洁净气流不受干扰。打开各种瓶盖前先过火,以固定灰尘,打开的瓶口、试管口过火,镊子、接种器使用前应经火灼烧以再除菌。


7、不要在工作台面上记录,工作时应尽量避免明显扰乱气流的动作。


8、工作完毕后,也必须以75%酒精擦拭台面,并且将使用过的器具材料归定位,垃圾清理干净,停止风机运行,关掉照明灯,将上述不属于超净台面的个人物品拿走。


9、操作员需严格按照上述规程实验,使用移液器时用酒精棉擦拭移液器、吸头等用前需做好灭菌,且仅限个人使用。


10、为配合工作,避免染菌,超净台周围需定期进行打扫并消毒。用福尔马林(40%甲醛)加少量高锰酸钾定期对房间进行密闭熏蒸。


11、超净工作台进风口的背面或正面的下方,金属网罩内有一普通泡沫塑料片或无纺布,用以阻挡大颗粒尘埃,应常检查、拆洗,如发现泡沫塑料老化,要及时更换。工作台面正面的金属网罩内是超级滤清器,超级滤清器也可更换,如因使用年久,尘粒堵塞,风速减小,不能保证无菌操作时,则可换上新的。


三、通风柜

通风橱的作用是保护实验室人员远离有毒有害气体,但也不能排出所有毒气。


1、化学药品和实验仪器不能在出口处摆放。


2、在做实验时不能关闭通风。



四、培养箱

培养箱是培养微生物的主要设备,可用于细菌、细胞的培养繁殖。其原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境,如控制一定的温度、湿度、气体等。培养箱使用过程整体要注意以下几点:


1、培养箱应放置在清洁整齐、干燥通风的工作间内,箱内的培养物不宜放置过挤,之间应保持适当间隔,以利冷(热)空气的对流循环。无论放入或取出物品应随手关门,以免温度波动。


2、带有制冷压缩机的要遵守冰箱保养的注意事项,如保持电压稳定、不要过度倾斜、不要短时间内反复开关仪器、及时清扫散热器上的灰尘等。


3、隔水式培养箱应注意先加水再通电,同时应经常检查水位,及时添加水。


4、开关细胞培养箱要小心,培养箱打开后要尽快关上,先要扭紧玻璃门,再关上培养箱门。培养箱铁架子和盛水托盘要定时高压灭菌处理。随时留意最底层的盛水托盘,必要时补充高压灭菌水。随时留意细胞培养箱二氧化碳浓度,必要时立即更换二氧化碳钢瓶。


五、摇床(振荡器)

1、电源必须有可靠的保护接地线,禁止非专业人员拆卸电器控制部分。


2、仪器长时间低温运行时,要注意除霜或按期做加热驱潮处理。


3、摇床高速旋转工作时,为避免仪器产生大的振动,所占的培养试剂瓶应在摇台上对称放置,各瓶的培养液应大致相等。


4、仪器长期不用时,特别是在雨季或潮湿季节,应定期通电运行5-8h以驱除设备电气元件吸附的水分。


5、带有制冷压缩机的要遵守冰箱保养的注意事项,如保持电压稳定、不要过度倾斜、不要短时间内反复开关仪器、及时清扫散热器上的灰尘等。


6、务必将东西放牢,并在启动前确认别人的东西已经放牢。


7、一定要在摇床开启直至生至最大转速后,摇床运行平稳后才能离开。


8、若不慎将液体洒出,一定要将其擦干净,防止滋生杂菌。


9、若有东西掉入机芯或卡在摇板底下无法清理,请关闭摇床转移所有培养物,并第一时间告知负责人。严禁带故障运行。



六、高压灭菌锅

1、只有经过专业训练的持证的人员能操作灭菌锅。


2、请及时取出已灭菌物品,注意不要将未灭菌的器皿及培养液放在已灭菌区,以免发生污染。


3、含有液体的瓶子在灭菌时要方正,以防倾倒, 新配的培养液需及时灭菌,不可直接室温放置过夜。


4、灭菌锅内的水每隔一段时间需定期更换,看到锅内水颜色发生明显变化请及时换水。


5、灭菌锅是高温高压仪器,操作不当易发生危险。因此禁止过夜灭菌,减少安全隐患。



七、水浴锅、金属浴、电磁炉、微波炉、酒精灯等

常见的加热设备有:水浴锅、金属浴、电磁炉、微波炉、酒精灯等。


1、使用水浴时要注意水浴中的水量,避免水被蒸发干,达不到加热的目的。


2、金属浴使用要注意高温时不要被烫伤,使用完及时关闭。


3、电磁炉用于加热水和煮东西,使用时必须有人照看,不能用手触摸加热板。


4、微波炉主要用来融化胶或培养基,使用时必须有人照看。


5、严禁使用玻璃酒精灯,统一使用防爆酒精灯。使用酒精灯时,周围不要有易燃物。当罐内酒精耗剩20毫升左右时,停止使用,如需继续工作,要把喷灯熄灭后再增添酒精,不能在喷灯燃着时向罐内加注酒精,以免引燃罐内的酒精蒸气。


使用喷灯时如发现罐底凸起,要立即停止使用,检查喷口有无堵塞,酒精有无溢出等。每次连续使用的时间不要过长。如发现灯身温度升高或罐内酒精沸腾(有气泡破裂声)时,要立即停用,避免由于罐内压强增大导致罐身崩裂。


八、烘箱及干燥箱

1、烘箱及干燥箱是用来干燥固体样品中少量的水分和可能存在的有机溶剂。主要用于烘干玻璃器皿、塑料离心管、枪头等,因此设定温度为60℃-65℃,不得高于65℃;


2、使用时才开烘箱,烘箱开启时实验室必须有人在;


3、烘箱禁止开机过夜,因此最后走的人一定要确认烘箱关机。



九、离心机

1、应按照操作手册来操作离心机。


2、离心机必须配平,不同型号管子离心时,需用天平称量,重量相等以后才可对称放入离心。离心管平衡误差应在0.1g以内。


3、有机及易腐蚀性样品,需检查是否渗漏,离心后清理离心机内腔。


4、离心时离心管所盛液体不能超过总容量的2/3,切不能放入过多的液体以免离心时液体溢出。使用前后都应注意转头内有无漏出液体,及时清理漏液及离心机内腔,应使之保持干燥。


5、当使用冷冻离心操作时,运行完成后,必须擦干内腔中的冷凝水,并倒掉机下的盘子内的冷凝水。为避免冷凝水的形成,使用完后必须打开机盖放置一段时间。


6、不需要冷冻离心时,请将离心温度调至室温。


7、离心机启动前应盖好离心机的盖子,离心开始后应等离心速度达到所设的速度方可离开,一旦发现离心机异常(如不平衡而导致机器明显震动,或噪音很大),应立即按下停止键,必要时直接按电源开关切断电源,停止离心,并找出原因。


8、使用结束后及时取走自己的物品,并清洁转头和离心机腔,不要关闭离心盖,利于湿气蒸发。


9、离心机在预冷状态时,离心机盖必须关闭,离心结束后取出转头要倒置于实验台上,擦干墙内余水,机盖处于打开状态。


10、转头盖要摆放在离心机的平台上或者摆放在实验台上,千万不可不拧紧浮放在转头上,因为一旦误启动,转头盖就会飞出,造成事故。


11、要定期对离心机的转头、内腔进行清洗,对转头、转轴、转头盖等地方要定期加润滑油。


12、离心机应该放置勿在干燥、室温、扬尘少的地方使用。



十、温度计

温度计一般有酒精温度计、水银温度计、石英温度计及热电偶等。低温酒精温度计测量范围-80℃~ +50℃;酒精温度计测量范围 0℃ ~ +80℃;水银温度计测量范围 0℃ ~ +360℃;高温石英温度计测量范围 0℃ ~ +500℃,热电偶在实验室中不常用。实验室人员应选用合适的温度计。温度计不能当搅拌棒使用,以免折断。水银温度计破碎后要用吸管吸去大部分水银,然后用硫磺覆盖剩余的水银。数日后进行清理。



十一、pH计(酸度计)

1、仪器标定校正的次数取决于试样、电极性能及对测量的精确度要求,一般经一次标定后可连续使用一周或更长时间,pH计校准时使用对应校准液,按照仪器说明书校准,在下列情况时,仪器必须重新标定:

(a)长期未用的电极和新换的电极。

(b)测量浓酸(pH<2)以后,或测量浓碱(ph>12)以后。

(c)测量含有氟化物的溶液和较浓的有机溶液以后。

(d)被测溶液温度与标定时的温度相差过大时。


2、pH电极前端的保护瓶内有适量电极浸泡溶液,电极头浸泡其中,以保持玻璃球泡和液接界的活化。测量时旋松瓶盖,拔出电极,用纯水洗净即可使用。使用后再将电极插进并旋紧瓶盖,以防止溶液渗出,如发现保护瓶中的浸泡液有混浊,发霉现象,应及时洗净,并调换新的浸泡液。


3、电极应避免长期浸泡在纯水、蛋白质溶液和酸性氟化物溶液中,并防止和有机硅油脂接触。


4、经常保持仪器的清洁和干燥,特别要注意保持电计、电极插口的高度清洁和干燥,否则将导致测量失准或失效,如有沾污可用医用棉花和无水酒精揩净并吹干。


5、复合电极前端的敏感玻璃球泡,不能与硬物接触,任何破损和擦毛都会使电极失效。测量前和测量后都应用纯水清洗电极,清洗后将电极甩干,不要用纸巾擦试球泡,这样会使电极电位不稳定,延长响应时间。在粘稠性试样中测定后,电极需用纯水反复冲洗多次,以除去粘在玻璃膜上的试样,或先用适宜的溶剂清洗,再用纯水洗去溶剂。


6、电极经长期使用,或被测溶液中含有易污染敏感玻璃球泡或堵塞液接界的物质,而使电极钝化,其现象是敏感梯度降低,响应慢,读数不准。


7、pH电极电极斜率低于85% 时(视测试精度和范围而定,且校正缓冲溶液要准确),则应考虑对电极进行活化处理或更换电极。


十二、移液器

移液器操作规范和使用注意事项:


1、设定移液体积

从大量程调节至小量程为正常调节方法,逆时针旋转刻度即可;从小量程调节至大量程时,应先调至超过设定体积刻度,再回调至设定体积,这样可以保证移液器的精确度。


2、选择吸头

选用与移液器匹配且有质量的吸头。吸头作为实验室常用的一次性耗材,其重要性常常被忽视。低质量的吸头不仅会存在残留污染物到样品中的风险,而且还会影响到移液系统的密封性以及精准性。反之,高质量的吸头具有光滑无瑕疵及高度的均一性,如此才能保证实验结果的重现性。


3、吸液及放液

垂直吸液,吸头尖端浸入液面3mm以下,吸液前枪头先在液体中预润洗;慢吸慢放,放液时如果量很小则应吸头尖端可靠容器内壁。


4、吸有液体的移液枪不应平放,枪头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈。


5、移液器在每次实验后应将刻度调至最大,让弹簧回复原型以延长移液器的使用寿命。


6、吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指,绝不允许突然松开,以防将溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气。


7、为获得较高的精度,吸头需预先润洗至少3次,使得空气柱充满饱和的液体分子(特别是在移取易挥发性液体时),可最大限度降低空气柱带来的误差。


8、浓度和粘度大的液体,会产生误差,为消除其误差的补偿量,可由试验确定,补偿量可用调节旋钮改变读数窗的读数来进行设定。


9、在设置量程时,请注意旋转到所需量程,数字清清楚楚在显示窗中,所设量程在移液器量程范围内不要将按钮旋出量程,否则会卡住机械装置,损坏了移液器。


10、移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体(如浓酸、浓碱、有机物等)。


11、不要用大量程的移液器移取小体积的液体,以免影响准确度。移液器最大量程的 30%-100% 是推荐适用范围,在移液时,吸头内的空气柱体积越小,误差越低。同时,如果需要移取量程范围以外较大量的液体,请使用移液管进行操作。


十三、纯水系统

1、为了进一步降低用水成本、节约能源,请根据需求分级取用纯水。


2、节假日或长时间无人看护时,请关闭设备水源、电源,以防意外发生。


3、超纯水设备需要定期清洗或更换内部滤芯。因为不管使用哪一种材料的滤芯,经过一段时间的工作都会吸附上很多杂质,很容易成为细菌滋生的温床。在超纯水机滤芯使用周期上,应该严格执行定期更换的标准,规范滤芯的后期保养服务。滤芯定期更换,清洗、维护,确保超纯水机水质的合格性。


4、有故障及时解决。纯水设备在运行过程中,如果出现故障,应当及时检修维护,以免小问题变成大麻烦。


十四、旋转蒸发仪

1、旋转蒸发仪适用的压力一般为10~30mmHg。


2、旋转蒸发仪各个连接部分都应用专用夹子固定。


3、旋转蒸发仪烧瓶中的溶剂容量不能超过一半。


4、旋转蒸发仪必须以适当的速度旋转。


十五、电泳仪

1、电泳仪通电进入工作状态后,禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分,也不能到电泳槽内取放东西,如需要应先断电,以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端,以防漏电。


2、仪器通电后,不要临时增加或拨除输出导线插头,以防短路现象发生,虽然仪器内部附设有保险丝,但短路现象仍有可能导致仪器损坏。


3、由于不同介质支持物的电阻值不同,电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳至终点所需时间也不同,故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。


4、在总电流不超过仪器额定电流时(最大电流范围),可以多槽关联使用,但要注意不能超载,否则容易影响仪器寿命。


5、某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时,允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必须先接好负载再开机,否则电压表指针将大幅度跳动,容易造成不必要的人为机器损坏。


6、使用过程中发现异常现象,如较大噪音、放电或异常气味,须立即切断电源,进行检修,以免发生意外事故。


十六、凝胶成像系统

凝胶成像分析系统可以应用在蛋白电泳凝胶,DNA凝胶,样品进行图像采集并进行定性和定量分析。使用注意事项:

1、注意开机顺序,先开凝胶成像系统,再打开电脑进入软件。


2、紫外凝胶照相时要防止EB污染仪器,凝胶成像系统的门不能用污染的手套接触,进行软件操作时同样不能被污染的手套接触。


3、在使用紫外光源照相的过程中,不可以打开凝胶成像系统前面板。


4、照相后将废胶取出,并用较软的纸擦拭干净。


5、调焦时要轻,动作不要剧烈。


6、保持观测室内环境干燥,及时将遗留在观测板上的水或其他液体檫干。


7、使用仪器时,要将门及观测台关紧,否则将无法正常使用紫外灯。


8、尽可能不要将电脑连接到因特网或局域网上,同时在电脑上安装杀毒软件,做到专机专用。


9、较长时间不用仪器时,请将仪器用防尘罩盖上。


10、为延长灯管的使用寿命,请观测好凝胶后及时关闭光源。


十七、荧光生物显微镜

1、使用分析测试中心显微镜,必须预约和登记。开机先开显微镜电源,需要用荧光时再开荧光;开机后,放上待观察样品,首先明场观察(bright field)时,请选择合适的物镜,物镜倍数从小到大观察。将样品置于载物台上,调节高度和亮度。转动载物台时,请轻轻转动。用完需将亮度调到最低再离开。


2、观察荧光时,首先打开荧光光源,等待几分钟后再观察。选择合适的激发光,观察完必须将荧光关闭再离开。


3、拍摄图像时,在相连接的电脑上打开相应软件,将显微镜的相应旋钮打到view上,调节曝光时间等参数。用完需要将光源和照相机关闭。


4、用完后,请核对是否关闭荧光光源和显微镜电源,聚光镜是否盖上盖子,载物台是否放置低位,物镜是否调至无物镜对准载物台,然后罩上目镜,盖上红布袋防灰尘。


5、请在记录本上如实登记。


6、仪器的光源是有寿命的,请本着节约原则,完成实验时请及时关灯。若两次使用间隔时间短可以不必关灯,若间隔时间长请及时关灯。因为经常开关仪器也会影响光源寿命。


7、物镜不可用手或者其他物体触摸。所以观察样品尽量盖盖玻片,如果没盖盖玻片的请务必注意样品不得沾到并污染物镜,若不小心污染了物镜,请及时用擦镜纸按“水→70%乙醇→100%乙醇”步骤从中心向外螺旋转圈清理对应物镜。


十八、普通冰柜冰箱

1、冰箱内不能放置易燃、易挥发性溶液。冰箱门上应注明这一点。


2、严禁在实验用的冰箱和冰柜内存放食品。


3、冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁,放于冰箱和冰柜内的所有容器密封,并定期清洗冰箱及清除不需要的样品和试剂。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护,清理后要对内表面进行消毒。


4、储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。


5、要遵守冰箱保养的注意事项,如保持电压稳定,不要过度倾斜,及时清扫散热器上的灰尘等。


十九、超低温冰箱

1、个人放东西不准用小袋子装着直接放冰箱,因为塑料袋子-80℃下容易破裂而导致样品洒出,所以东西都得用盒子装好放置。


2、开启冰箱时,最好集中开冰箱,开冰箱时可以大家约一下一起取放东西。


3、开冰箱动作要快,存取样品时门开得不要过大,存取时间尽量要短。不要让冰箱温度降太厉害。如果需开启时间较长,请分次开启。


4、放置样品必须整齐摆放,避免样品堆积在铁柜后面导致冰箱门关不严实,以致温度升高。


冰箱维护日常

1、个人放东西不准用小袋子装着直接放冰箱,因为塑料袋子-80℃下容易破裂而导致样品洒出,所以东西都得用盒子装好放置。


2、开启冰箱时,最好集中开冰箱,开冰箱时可以大家约一下一起取放东西。


3、开冰箱动作要快,存取样品时门开得不要过大,存取时间尽量要短。不要让冰箱温度降太厉害。如果需开启时间较长,请分次开启。


4、放置样品必须整齐摆放,避免样品堆积在铁柜后面导致冰箱门关不严实,以致温度升高。


二十、分光光度计

1、比色皿光滑面透光,要保持光滑面干净,取拿比色皿时,手指只能捏住比色皿的毛玻璃面,而不能碰比色皿的光学表面。


2、比色皿中的液体最好不要超过容积的2/3。


3、注意使用分光光度计时一定要用对照调零。


4、更换待测溶液时,分光光度计的盖子要及时盖上,保持里面黑暗环境。


5、仪器的光源是有寿命的,请本着节约原则,完成实验时请及时关灯。若两次使用间隔时间短可以不必关灯,若间隔时间长请及时关灯。因为经常开关仪器也会影响光源寿命。


6、比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤,也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干,不要擦拭,以免损伤它的光学表面。


二十一、天平

天平刻度要校正,并记录,天平的托盘在每次使用后必须清洁,避免残留物污染。


二十二、紫外灯

手提式或盒式紫外灯在使用时决不能使紫外光直射眼睛,以免造成眼损伤。


二十三、液氮罐等冷却液容器

液氮和干冰是最常用的冷却剂。异丙醇、乙醇、丙酮通常和干冰混合使用。致冷剂一般会产生下列危险:


(1)因低温引起皮肤冻伤;

(2)中毒(如溶剂、二氧化碳引起);

(3)燃性(如氧气、溶剂引起);

(4)窒息(如氮引起);

(5)容器因脆化或加压而损坏。


1、干冰:由于固体二氧化碳的温度很低,很易灼伤皮肤,因此,必须戴上手套或用钳子、铲子、铁勺等工具进行操作。


2、工业乙醇及丙酮经常与干冰混合使用。一般可达到-78℃的低温。


3、为保证细胞库细胞的存活及其他科研需求的延续性,任何人当发现在取液氮或者细胞株时,应注意液氮存量不低于液氮罐高度的一半,一旦发现液氮少于此标准,应立即通知送液氮师傅。取用液氮需佩戴护目镜和防冻手套,用完后,放回指定位置。



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